产品货号:
GS1411
中文名称:
酵母蛋白提取试剂盒
英文名称:
Yeast Total Protein Extraction Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品含有EDTA,山梨醇及蜗牛酶,蛋白酶抑制剂等成分,其中蜗牛酶在合适的等渗体系中消化酵母的细胞壁,在用等渗液冲洗后,用含有蛋白酶抑制剂和温和去污剂的低渗缓冲液进行反复冻溶,促使细胞破裂从而释放蛋白质,可以应用于酵母蛋白和重组胞内蛋白的Western blot、SDS-PAGE、2D和免疫共沉淀等免疫学实验,每次可以处理50mg的湿重酵母,可以使用50次。
组分 | 规格 | 保存 |
等渗液 | 75mL | 2~8℃ |
低渗液 | 25mL | |
蜗牛酶 | 250μL | -20℃ |
PMSF | 250μL |
保存:按标签指示条件保存,有效期2年。
- 应按照每50mg湿重的菌体加500μL的等渗液和5μL的蜗牛酶的标准等比例混匀,菌体的量不能够过多,否则会使得菌体裂解不充分。
- 裂解后的酵母菌蛋白液应置于-20℃的冰箱中保存。
- 在跑电泳时,由于蜗牛酶已经被冲洗,一般不会产生杂带,但由于冲洗不干净或蜗牛酶浓度较高时也可能产生与蜗牛酶相关的几个条带,注意区别。
- 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算,为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能,将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
- 溶液使用后,请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
- 本试剂只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果,概不承担责任。
- 将酵母在28~30℃的环境中培养到OD600=1.0左右。8000rpm(5000g)离心1min,收集菌体并称量菌体的湿重。
- 每50mg湿重的菌体中加入500μL等渗液,5μL蜗牛酶和1μL的β-巯基乙醇(需用户自备),枪头吹吸或者涡旋振荡,将菌体悬浮。
- 30℃水浴60min,5000rpm(2500g)离心1min,弃掉上清,收集沉淀。
- 用500μL等渗液重悬,再5000rpm(2500g)离心1min,弃掉上清,收集沉淀,重复洗涤一次。
- 加人500μL低渗液(使用前,在500μL低渗液中加入5μL的PMSF)重悬,再放入-20℃冰箱中冷冻30min后移置室温溶解(此冻溶步骤重复2~3次)。
- 裂解后的溶液12000rpm(12830g)离心5min后,取上清即为酵母菌蛋白液可用于后续实验及分析。
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